誘導培養基和增殖培養基的配制需基于植物種類、外植體類型及實驗目標進行精準設計,但其核心流程一致:?以合適的基礎培養基為載體,添加特定比例的植物生長調節劑,并嚴格控制理化條件。以下是系統性配制方法:
一、通用配制流程(適用于大多數植物組織培養)
無論誘導或增殖階段,培養基配制均遵循以下步驟:
計算與稱量
根據目標培養基配方,精確稱取大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、蔗糖、瓊脂及植物激素。
溶解與混合
將各成分依次加入約2/3體積的蒸餾水中,加熱攪拌至完全溶解(瓊脂需加熱熔化)。
調節pH值
使用0.1 mol/L NaOH或HCl將培養基pH調整至5.8(多數植物適宜范圍為5.6–6.0)。
定容與分裝
加蒸餾水定容至所需體積,分裝入三角瓶或試管中。
加塞包扎與滅菌
用棉塞封口,外包牛皮紙,采用高壓蒸汽滅菌(121℃、0.103 MPa,維持15–20分鐘)。
無菌檢查與保存
滅菌后于37℃恒溫培養24–48小時確認無菌,隨后置于2–8℃避光保存備用。
關鍵提示:激素應在滅菌前加入,但對熱敏感的物質(如某些抗生素)可在冷卻至約60℃時再添加。
二、誘導培養基的特異性配制要點
誘導培養基的核心是?啟動細胞脫分化或器官發生,常用于外植體初代接種。
常見配方結構:
基礎培養基:MS培養基最常用,營養全面。
植物激素組合:
細胞分裂素(如6-BA):0.5–2.0 mg/L,促進芽原基形成;
生長素(如NAA或2,4-D):0.1–0.5 mg/L(誘導芽),或更高濃度用于愈傷組織誘導。
附加成分:蔗糖30 g/L,瓊脂6–7 g/L(固體培養基)。
三、關鍵差異總結
實踐建議:可通過預實驗優化激素配比,結合外植體響應動態調整方案。
四、增殖培養基的特異性配制要點
增殖培養基旨在?高效擴增已形成的不定芽或叢生芽,強調繁殖系數與遺傳穩定性。
常見配方結構:
基礎培養基:MS或WPM,部分植物使用1/2MS以降低鹽分抑制。
植物激素組合:
細胞分裂素(如6-BA):濃度?高于誘導階段?(如3.0–4.0 mg/L),強烈促進腋芽萌發;
生長素(如NAA):濃度?低于誘導階段(如0.1 mg/L),避免過度生根或愈傷化。
可選添加物:活性炭(0.02%)用于吸附有害代謝物,提高芽質量。